青鏈霉素混合液的使用說(shuō)明
使用說(shuō)明
1、溶液P1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。
2、*次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在漂洗液中加入無(wú)水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無(wú)水乙醇)。
3. 使用前請(qǐng)先檢查溶液P2、P3和P4是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
4. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50ul，體積過(guò)小影響回收效率；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍)， pH值低于7. 0會(huì)降低洗脫效率。 DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。
5. 質(zhì)粒DNA濃度＞1mg/ml時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒DNA本身的性質(zhì)，清除過(guò)程可導(dǎo)致部分質(zhì)粒DNA丟失，但內(nèi)毒素卻能得到大限度清除。
6. 所有溶液應(yīng)用無(wú)內(nèi)毒素的高純水配制，所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。
7. DNA濃度及純度檢測(cè)：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響吸光值，但并不表示純度低。
青鏈霉素混合液用于預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)菌污染，特別是革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌的污染。產(chǎn)品經(jīng)過(guò)濾除菌處理，可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。青霉素的含量為10kU/ml，鏈霉素的含量為10mg/ml。在細(xì)胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。即按照100倍稀釋使用即可
