1.配料
配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。
2.溶解
淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀
加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調(diào)PH
用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進(jìn)行過濾。（有時(shí)可以省去）
5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng)，則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；
固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。
6.包扎
分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞，培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個(gè)斜面，約占試管長(zhǎng)度的1/2。
9.貯存
培養(yǎng)基在30℃下放置，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。
