CCK-8實驗可檢測細胞活力、增殖、細胞毒性等,廣泛應用于藥物篩選等臨床前實驗研究。
1. 細胞鋪板
將檢測細胞對象按照合適的細胞濃度接種到96孔板,一般來說,每個孔這種3000-5000個細胞就可以了。當然如果是檢測細胞增殖的話,可以降低細胞濃度,細胞過密會抑制細胞增殖。尤其對于貼壁細胞,細胞過密會出現(xiàn)細胞脫板現(xiàn)象,嚴重影響實驗結果?;旧?6孔板的邊緣不接種細胞,但加入培養(yǎng)基或PBS以排除邊緣效應。每個組做3個復孔。
2. 加藥刺激
細胞鋪板后,按照實驗設計的時間點加入藥物刺激。藥物一般需要等比或者對倍稀釋,這里就不詳細贅述了。在加藥物前細胞清洗2遍,這里要強調一點就是細胞拍板的時候力度要掌握好,輕了培養(yǎng)液拍不干凈,重了會使細胞脫落。加藥時*是用排槍加,此時不要讓培養(yǎng)基中產生氣泡。
3. 加CCK-8孵育,上機檢測
每孔加入10微升CCK8溶液,同時避免產生氣泡。也可根據(jù)實驗需要調整加入CCK8的量,但是組間要統(tǒng)一。加入CCK8后,避光孵育1-4小時后,酶標儀檢測OD450 nm處吸光值。
整個過程看似簡單,但有幾個地方要特別注意,包括細胞接板的密度、洗細胞時不要將細胞拍脫落、加藥和CCK8溶液時不要產生氣泡。注意這幾點,基本上CCK8實驗就能做出重復性較好的結果了。
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