丙酮酸測定試劑盒的測定步驟:
1、 分光光度計預熱30min 以上,調節(jié)波長至520nm,蒸餾水調零。
2、取300μL 樣本+100μL 試劑一于1.5mL EP 管中,混勻,靜置2min,加入500μL 試劑二,混勻,于520nm波長處測定管吸光值A。
丙酮酸的計算方法:
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675; x 為丙酮酸含量(µg/mL),y 為吸光值。
2、按照血清(漿)體積計算
丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675)
3、按照蛋白濃度計算
丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照樣品質量計算
丙酮酸含量(µg/g 鮮重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2)=0.043×(A-0.0675)
V1:加入反應體系中樣本體積,0.3mL;V2:加入提取液體積,1 mL;V3:加入血清(漿)體積,0.1 mL;
Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500 萬。