胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈,是一種重要的消 化酶。 胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯鍵，生成 BA，BA 在 253nm 處有吸收峰，通過測(cè)定 253nm 吸光度增加速率，即可計(jì)算出胰蛋白酶的活性。
胰蛋白酶測(cè)定試劑盒的測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到555 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一(V)：試劑二(V)：蒸餾水(V)：試劑三(V)=1 mL：1 mL：5.4 mL：0.4 mL的比例充分混合。(注意：現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個(gè)空瓶)
3. 吸取25μL樣本，加入975 μL工作液，混勻后立即測(cè)定，記錄555nm下1min時(shí)的吸光值A(chǔ)1和2min時(shí)的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算△A=A1-A2
注 意：
1、如果△A小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果△A大于0.5，體系迅速變色，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定(建議稀釋10倍)，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
2、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
3、實(shí)驗(yàn)時(shí)要使底物避光保存。
