背景介紹
中性粒細(xì)胞是豐富的粒細(xì)胞類型,占人類所有白細(xì)胞的40%至70%。作為宿主抵抗入侵病原體的第一道防線,中性粒細(xì)胞具備固有的吞噬能力,可以吸收納米顆粒和吞噬死亡的紅細(xì)胞,并在激活后清除外來病原體和加載靶點(diǎn);而且,還能跨血管遷移到臨近組織的能力。中性粒細(xì)胞是在瑞氏(Wright)染色血涂片中,胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色,有許多彌散分布的細(xì)小的(0.2~0.4微米)淺紅或淺紫色的*顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2~5分葉狀,葉與葉間有細(xì)絲相連。中性粒細(xì)胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細(xì)胞來源于骨髓,具有分葉形或桿狀的核,胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細(xì)顆粒。這些顆粒多是溶酶體,內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類,與細(xì)胞的吞噬和消化功能有關(guān)。
圖1.中性粒細(xì)胞瑞氏
(Wright)染色圖片
注:紫色為中性粒細(xì)胞;粉色為紅細(xì)胞
產(chǎn)品介紹
作為天然免疫細(xì)胞的重要組成部分,中性粒細(xì)胞在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,常需分離人及動(dòng)物外周血中性粒細(xì)胞進(jìn)行研究。
市售產(chǎn)品-中性粒細(xì)胞分離試劑盒的產(chǎn)品缺點(diǎn)
目前,市面上大多數(shù)中性粒細(xì)胞分離試劑盒主要是根據(jù)全血中各細(xì)胞密度不同的特點(diǎn),通過密度梯度離心法獲取目的細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)過程中多存在以下問題并在一定程度上影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1. 離心時(shí)紅細(xì)胞沉降不全面,多聚集于中性粒細(xì)胞白膜層,導(dǎo)致白膜層不清晰;
2. 增加離心時(shí)間或離心力后,可以部分改善紅細(xì)胞沉降結(jié)果,但仍能明顯看到紅細(xì)胞存在于白膜層或分離液中,且白膜層出現(xiàn)彌散;
3. 收集到的中性粒細(xì)胞層混有大量紅細(xì)胞,可使用紅細(xì)胞裂解液祛除紅細(xì)胞干擾,但花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)且有可能影響中性粒細(xì)胞表面抗原的表達(dá);
4. 獲取的細(xì)胞數(shù)量少且中性粒細(xì)胞純度低。
市售產(chǎn)品-中性粒細(xì)胞分離試劑盒的分離結(jié)果展示
圖2. 中性粒細(xì)胞分離試劑盒離心實(shí)際效果圖
(人中性粒細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)為例)
注:中性粒細(xì)胞層有很多肉眼可見紅細(xì)胞污染
圖3. 中性粒細(xì)胞分離吉姆薩染色結(jié)果
(人中性粒細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)為例)
注:中性粒細(xì)胞層經(jīng)染色后涂片觀察,
圖片中紫色為中性粒細(xì)胞;
圖片中粉色為紅細(xì)胞
為了進(jìn)一步優(yōu)化中性粒細(xì)胞分離效果,索萊寶研發(fā)了細(xì)胞分離專用的紅細(xì)胞沉降液(貨號(hào)R1000),采用新的“先沉降紅細(xì)胞,后進(jìn)行細(xì)胞分離"的實(shí)驗(yàn)方式,以較大程度降低紅細(xì)胞的污染,并且提高了中性粒細(xì)胞的純度及獲得量。
新品-中性粒細(xì)胞分離試劑盒的試劑組成
名稱 | 規(guī)格 | 保存 |
試劑A | 200ml | 常溫保存 |
試劑C | 100ml | 常溫保存 |
紅細(xì)胞沉降液 | 100ml | 常溫保存 |
細(xì)胞洗滌液 | 200ml | 常溫保存 |
新品-中性粒細(xì)胞分離試劑盒的產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1. 同常規(guī)分離方案比,優(yōu)化后的方案雖然增加了沉降紅細(xì)胞的時(shí)間,但大大減少了離心時(shí)間且無需進(jìn)行紅細(xì)胞裂解,故二者總用時(shí)差異不大;
2. 使用優(yōu)化方案離心后,離心管內(nèi)中性粒細(xì)胞白環(huán)層較常規(guī)更加清晰且無紅細(xì)胞聚集;
3. 優(yōu)化后中性粒細(xì)胞的純度較常規(guī)有明顯提高。
新品-中性粒細(xì)胞分離試劑盒的分離結(jié)果展示
以人中性粒細(xì)胞分離試劑盒(P9402)為例說明
圖4. 紅細(xì)胞沉降液沉降及分離效果圖
圖5. 中性粒細(xì)胞分離試劑盒實(shí)際效果圖
注:中性粒細(xì)胞層幾乎沒有肉眼可見紅細(xì)胞污染
圖6. 中性粒細(xì)胞分離試劑盒染色結(jié)果
注:中性粒細(xì)胞層有極少紅細(xì)胞污染,
中性粒細(xì)胞純度可以到90%至95%。
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