RIPA組織/細(xì)胞裂解液使用說明書
貨號(hào)：R0010
規(guī)格：20ml/100ml
本產(chǎn)品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）
保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20 ℃保存。
使用說明：
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀,請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量，取每1mlRIPA加入10ul PMSF，使PMSF的終濃度為1mM?；靹騻溆茫≒MSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。
1、樣品前處理：
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。 用玻璃勻漿器勻漿，直充分裂解。
2、后處理：
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項(xiàng)：
本試劑為強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時(shí)，也會(huì)將基因組一并釋放出來，造成細(xì)胞裂解液粘稠，此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測(cè)定濃度，可入加少量SDS（1%），煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。
如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
相關(guān)產(chǎn)品：
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1016 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇）
S1010 10% SDS
PR1400 低分子量蛋白MARKER
PC002 BCA法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
PC0030 Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
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