LB培養(yǎng)基分類及倒板是什么 LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,生化分子實驗中一般用該培養(yǎng)基來預培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.
液態(tài)培養(yǎng)基
根據(jù)《分子克隆實驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基,應該在950 ml去離子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
搖動容器直溶質溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH7.0.用去離子水定容1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌.通過培養(yǎng)工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質粒,工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎.
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化鈉(NaCl) 10g/L
另外根據(jù)經(jīng)驗值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達到7.4(該pH適合目前使用廣的原核表達菌種E.coli的生長)
固態(tài)培養(yǎng)基
生素,并且倒好板。
倒板
1.配制:100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉
2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過高導致抗生素失效,并充分搖勻。
3.倒板:一般15ml-20ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。
4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個月內(nèi)使用。
ph值需要控制在7.4