2015-08-18 索萊寶生物
1實驗原理
細胞在變性劑的作用下被裂解，同時核蛋白體上的蛋白變性，核酸釋放；釋放出來的DNA和RNA由于在特定PH下溶解度的不同而分別位于整個體系中的水相和中間相，從而得以分離；有機溶劑抽提，沉淀，得到純凈DNA。
2試驗方法
材料準備→破碎細胞，釋放內容物→核酸分離、純化→核酸的沉淀或吸附及雜質的去除→核酸溶解保存
1.試劑盒提取法
公司產品
D1500 植物基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
D1600 細菌基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
D1700 動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒400.00/700.00
D1800 全血基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
D1850 全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng) solarbio 50T/200T 盒 360.00/960.00
D1900 酵母基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
D2100 通用基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
D2300 真菌基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 500.00/850.00
D2400 DNA病毒基因組提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
D2600 土壤基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 680.00/1200.00
D2700 糞便基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00
2.苯酚氯仿提取法
實驗步驟
① 裂解液（SDS/異硫氰酸胍）、RNAse、蛋白酶K等55～65℃裂解細胞，使蛋白變性，釋放核酸，加入KAc以提高鹽濃度，使蛋白質、多糖等沉淀。
② 裂解*后加入一定體積的苯酚-氯仿，混勻后離心取上清；
③ 加入等體積氯仿-異戊醇，混勻后離心取上清水相；
④ 加入定量的異丙醇，使DNA沉淀，加入適量的核酸助沉劑或乙酸鈉以增加核酸的獲得率，離心除去上清；
⑤ 用70%的乙醇洗滌1～2次，加入適量氯化鈉或氯化鋰等去除多糖；(可用PEG代替乙醇，具有去多糖作用)
⑥ 待酒精揮發(fā)*后，用TE緩沖液溶解DNA，保存?zhèn)溆谩?/SPAN>
溫馨提示：本公司出售以上實驗中所用到的各種產品，有意者請！
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3常見問題
4注意事項
① 酚一定要堿平衡。苯酚具有高度腐蝕性，氯仿易燃、易爆、易揮發(fā)，具有神經毒作用，操作時應注意防護。
② 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾；
③ 乙醇洗滌后要充分晾干，以免影響后續(xù)反應；
④ 各操作步驟要輕柔,避免因機械損傷，造成DNA斷裂；
⑤ 為了您的安全，實驗室請帶防護口罩和手套。
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