產(chǎn)品名稱:線粒體分離和酶提取檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào):BC3270
產(chǎn)品特點(diǎn):線粒體分離和酶提取檢測(cè)試劑盒線粒體是半自主性細(xì)胞器,不僅是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場(chǎng)所,為細(xì)胞的活動(dòng)提供能量,而且在許多生命活動(dòng)中具有重要調(diào)控作用。因此,準(zhǔn)確和全面分離保持正常活性的線粒體已經(jīng)成為許多研究的前提。利用專(zhuān)門(mén)試劑溫和勻漿組織和細(xì)胞,再采用差速離心法從勻漿中分離完整線粒體;利用專(zhuān)門(mén)試劑,配合超聲波破碎線粒體,可以得到保持活性的線粒體酶。
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線粒體分離和酶提取檢測(cè)試劑盒
1、準(zhǔn)確稱取約0.1g 組織或收集約500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL試劑四,用冰浴勻漿器或研缽研磨。 2、4 ℃ 600 g 離心 5min。 3、棄沉淀,將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g 離心 10min。 4、上清液即胞漿提取物,可用于研究線粒體蛋白向胞漿的釋放。 5、沉淀為完整線粒體。含有完整的內(nèi)膜和外膜,并具有線粒體的生理功能??捎糜诰€粒體的生理功能等方面的研究。 6、在沉淀中加入200uL試劑二和2uL試劑四,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),可用于線粒體酶活性測(cè)定。 7、在沉淀中加入200uL試劑三和2uL試劑四,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),可用于線粒體蛋白濃度測(cè)定。
線粒體分離和酶提取檢測(cè)試劑盒
試劑一:50mL×1 瓶,-20℃保存;試劑二:10mL×1 瓶,-20℃保存;試劑三:10mL×1 瓶,-20℃保存;試劑四:1mL×1 支,-20℃保存;
1、分離線粒體和提取線粒體蛋白質(zhì)的所有步驟均需在冰上或 4℃進(jìn)行,所用溶液需冰浴或 4℃預(yù)冷。 2、通常在分離線粒體時(shí)前后兩次離心速度選取 600g 和 11,000g,如果希望純度更高,但對(duì)線粒體的得率要求不高,前后兩次離心速度可以采用 1000g 和 3500g。
3、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
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