產(chǎn)品名稱:胃蛋白酶活性檢測試劑盒
產(chǎn)品型號:BC2325
產(chǎn)品特點:胃蛋白酶活性檢測試劑盒測定意義:胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌,分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別,慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。測定原理:胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解,水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍色;一定范圍內(nèi),其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
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胃蛋白酶活性檢測試劑盒
胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌,分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別,慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解,水解產(chǎn)物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通過測定吸光值的變化來計算酶活。
胃蛋白酶活性檢測試劑盒
一、粗酶液提?。悍Q取約 0.1g 組織或者 0.1ml 胃液,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000 rpm 4℃離心 10 分鐘,取上清,即粗酶液,置冰上待測。
二、測定步驟:
1. 酶標儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長到 275 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 按下表操作:測定管 對照管樣本(μL) 20 - 試劑一(μL) 100 100 混勻,37℃保溫 10min。試劑三(μL) 100 100 搖勻 1min。樣本(μL) - 20 混勻后 10000rpm 4℃ 離心 10min,取上清用石英比色皿/96 孔 UV 板測定 A275nm。
1、用石英比色皿
按樣本蛋白濃度計算:活性單位(U)定義:37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶(U/mg prot)=(?A÷?÷d×V 反總)÷(Cpr×V 樣本)÷T = 0.786×?A÷Cpr (2) 按樣本鮮重計算:活性單位(U)定義:37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶(U/g)胃蛋白酶(U/g 鮮重)=(?A÷?÷d×V 反總)÷(W×V 樣本÷V 提)÷T =0.786×?A÷W。 Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;V 反總:反應(yīng)總體積,0.22mL;V 提:提取液體積,1mL;T:催化反應(yīng)時間,10min;V 樣本:加入樣本體積,0.02mL;?:酪氨酸吸光系數(shù),1.4? mol-1·mL·cm-1 ;d:光程,1cm。
2、用 96 孔 UV 板按樣本蛋白濃度計算:活性單位(U)定義:37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶(U/mg prot)=(?A÷?÷d×V 反總)÷(Cpr×V 樣本)÷T = 1.57×?A÷Cpr (3) 按樣本鮮重計算:活性單位(U)定義:37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶(U/g)胃蛋白酶(U/g 鮮重)=(?A÷?÷d×V 反總)÷(W×V 樣本÷V 提)÷T =1.57×?A÷W。 Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;V 反總:反應(yīng)總體積,0.22mL;V 提:提取液體積,1mL;T:催化反應(yīng)時間,10min;V 樣本:加入樣本體積,0.02mL;?:酪氨酸吸光系數(shù),1.4? mol-1·mL·cm-1 ;d:光程,0.5cm。
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