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【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：人外周血淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品名稱：人外周血淋巴細(xì)胞分離液
英文名稱：Human Lymphocyte Separation Medium

【檢測原理】
密度梯度沉降法是根據(jù)細(xì)胞密度差異，借助細(xì)胞分離液和離心，進(jìn)行細(xì)胞分離純化的常用方法之一。細(xì)胞梯度密度分離液產(chǎn)生一定程度的密度梯度，將稀釋后的全血鋪層于分離液之上。離心后，紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個核細(xì)胞。
本產(chǎn)品將葡聚糖和泛影葡胺按照一定比例混合，調(diào)整密度、滲透壓、pH值，經(jīng)過除菌過濾后制成一種密度在1.077g/mL并且與外周全血等滲的溶液（分離液），經(jīng)過密度梯度離心，使一定密度的細(xì)胞按照相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。
【檢驗方法】
1. 取新鮮抗凝全血，EDTA（枸櫞酸鈉或肝素）抗凝劑均可。用等體積PBS或0.9% NaCl稀釋全血。
2. 在離心管中加入一定體積的分離液，將稀釋后的血樣平鋪到分離液液面上方，保持兩液面界面清晰。分離液、抗凝未經(jīng)稀釋全血、PBS（或生理鹽水）體積為1:1:1。
3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子700-800g（2000-2500rpm）離心20-30min。
4. 離心結(jié)束后，管底是紅細(xì)胞，中間層是分離液，上層是血漿/組織勻漿層，血漿層與分離液層之間是一層薄較致密的白膜，即：單個核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）層。小心吸取白膜層到另一離心管中。
5. 用PBS或RPMI 1640稀釋到一定體積，顛倒混勻。室溫，水平轉(zhuǎn)子250g（1000rpm），離心10min，棄上清。重復(fù)洗滌1-2次。
6. 用PBS或合適的培養(yǎng)基將淋巴細(xì)胞重懸備用。
【主要組成成分】
本品為略帶黃色透明液體，主要組成成分是葡聚糖與泛影葡胺。
【儲存條件及有效期】
未開封并且4-30℃避光保存，有效期為2年；開包裝后保質(zhì)2周。
【適用儀器】
半徑15cm水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)。
【樣本要求】
本分離液要求樣本為新鮮的抗凝血，血液收集時應(yīng)無菌操作且儲存、處理和運輸過程中避免冷凍和冷藏。
【檢驗結(jié)果的解釋】
由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心的時間，摸索佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）
【檢驗方法的局限性】
本實驗要求，在正常大氣壓下，樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為(20±5)℃。
【注意事項】
1. 啟封后應(yīng)置4℃保存，避免微生物的污染。
2. 細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液溫度升室溫時，搖勻后使用。
3. 整個分離過程中，溫度應(yīng)控制在（20±5）℃且無菌環(huán)境下進(jìn)行，避免微生物的污染，否則會影響分離質(zhì)量。
4. 為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)該采血后盡快進(jìn)行分離。分離細(xì)胞層實際上是單個核細(xì)胞層，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
5. 分離時請嚴(yán)格按照比例，每一份淋巴細(xì)胞分離液加兩份稀釋后的血液。