產(chǎn)品名稱:苯丙氨酸解氨酶含量檢測
產(chǎn)品型號:BC0210
產(chǎn)品特點:苯丙氨酸解氨酶含量檢測測定原理:PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm處有Z大吸收值,通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
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苯丙氨酸解氨酶含量檢測試劑盒說明書
分光光度法 貨號: BC0210 規(guī)格:50 管/48 樣
苯丙氨酸解氨酶含量檢測產(chǎn)品簡介: PAL(EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中,是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶, 與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān),在植物正常生長 發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸 在 290nm 處有大吸收值,通過測定吸光值升高速率計算 PAL 活性。
試驗中所需的儀器和試劑: 紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1ml 比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 產(chǎn)品內(nèi)容: 提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:粉劑×3 瓶,4℃保存,臨用前每瓶加入 4mL 雙蒸水充分溶解待用;現(xiàn)配現(xiàn)用。 試劑三:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存;
操作步驟:
一、粗酶液提取: 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待 測。
二、測定操作表: 試劑名稱 測定管(μL) 對照管(μL) 樣本 20 試劑一 780 800 試劑二 200 200 混勻,30℃準(zhǔn)確水浴 30min 試劑三 40 40 混勻,靜置 10min 后,用對照管調(diào)零,290nm 處記錄測定管吸光值 A (A=A 測定管-A 對照管)。
PAL活性計算: (1)按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白在每 ml 反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個 酶活力單位。 PAL(U/mg prot)=A×反應(yīng)總體積(1040μL)÷樣本體積(20μL)÷反應(yīng)時間(30min)÷0.1 ÷蛋白 濃度(mg/mL)=17.3×A ÷蛋白濃度(mg/mL) (2)按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織在每 ml 反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個酶活力 單位。 PAL(U/g 鮮重)=A×反應(yīng)總體積(1040μL)÷﹝樣本鮮重(g)×樣本體積(20μL)÷V 樣總(1mL)﹞ ÷反應(yīng)時間(30min)÷0.1 =17.3×A ÷樣本鮮重(g)
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